Tin mới

Tập huấn Quy trình Sản xuất Củ Khoai môn giống từ Cây nuôi cấy INVITRO

29/03/2017

Cây Phúc bồn tử - Raspberry gồm có 3 loại là: Red-Raspberry; Black- Raspberry; Yellow-Raspberry, 3 loài này được phân biệt bởi dạng thân, màu sắc của gai lông và màu của quả. Hiện nay có 2 giống được trồng nhiều nhất đó là: Red Raspberry và Black Raspberry.

Theo điều tra của tổ chức FAO, năm 2002 trên thế giới có khoảng 414,031 triệu tấn sản phẩm thu từ cây Raspberry được phân bố trên 37 Quốc gia với diện tích canh tác khoảng trên 85000 ha, với năng xuất khoảng 5600kg/ha.

1. Chọn cây giống

Các mẫu nuôi cấy được sử dụng là những đốt thân ngắn ( 1-2cm) có mang một mầm nách lá, được cắt ra từ những cành phúc bồn tử đang sinh trưởng khỏe mạnh được trồng trong vườn. Loại mẫu  này dùng để thiết lập mẫu chồi mẹ ban đầu.

2.  Phương pháp khử trùng

Giai đoạn đưa đối tượng nghiên cứu từ bên ngoài vào điều kiện nuôi cấy in vitro là giai đoạn quyết định sự thành công của quá trình nuôi cấy. 

Quy trình khử trùng mẫu:

- Rửa mẫu cấy nhiều lần dưới vòi nước chảy cho sạch.

- Lắc mẫu trong dung dịch xà phòng loãng trong 2-3 phút.

- Rửa lại mẫu cấy nhiều lần dưới vòi nước chảy cho sạch.

- Đưa mẫu vào tủ cấy vô trùng, lắc mẫu trong dung dịch cồn 70% trong 30 giây.

- Tiến hành khử trùng mẫu bằng dung dịch HgCl2 nồng độ 1‰ trong 15 phút. Trong quá trình khử trùng luôn lắc nhẹ, đều tay để đảm bảo các mẫu cấy được khử trùng đều và không bị chết do tác động của chất khử trùng lên mẫu cấy.

- Rửa lại thật sạch mẫu bằng nước cất vô trùng

- Sau đó cắt, tách những phần mô bị tổn thương do chất khử trùng, mẫu mang chồi được cắt thành từng đốt dài 1.5-2 cm cấy vào ống nghiệm chứa 20ml môi trường ½ MS không có chất kích thích sinh trưởng đã được thanh trùng nuôi dưới ánh sáng 2500 lux, thời gian chiếu sáng 14 giờ/ngày, nhiệt độ phòng 23-28oC .

3. Môi trường và các giai đoạn nuôi cấy

3.1. Giai đoạn nuôi cấy khởi đầu

Mẫu phúc bồn tử sau khi được khử trùng bề mặt theo quy trình trên được cấy vào ống nghiệm trong môi trường MS không có chất kích thích sinh trưởng, đỉnh mầm hướng lên trên.

  - Giai đoạn khởi đầu sử dụng phương pháp nuôi cấy thoáng khí

Thành phần cơ bản của môi trường MS:

Thành phần đa lượng

mg/l

CaCl2.H2O

440

KH2PO4

170

KNO3

1900

MgSO4

370

NH4NO3

1650

Thành phần vi lượng

mg/l

MnSO4.H2O

22.3

ZnSO4.7H2O

8.6

H3BO3

6.2

KI

0.83

Na2MoO4.2H2O

0.25

CoCl2

0.025

CuSO4.5H2O

0.025

Fe EDTA

mg/l

NA2EDTA.2H2O

37.3

FeSO4.7H2O

27.8

Các Vitamine

mg/l

Glycine

2

MyO-Inositol

100

Acid Nicotinic

0.5

Pyridoxin HCl (B6)

0.5

                 Hình 3: Chồi Phúc bồn tử sau 4 tuần vào mẫu

3.2. Giai đoạn nhân nhanh

Để gây tạo cụm chồi thứ cấp, sử dụng các mẫu được nuôi sau 4 tuần trên môi trường không có chất kích thích sinh trưởng cấy vào môi trường nhân cụm chồi  MS có bổ sung 30g/l đường saccharose; 8,3g/l agar; bổ sung thêm 1 mg/l BAP và 0,1mg/l IBA.

3.3. Giai đoạn tạo cây hoàn chỉnh

Để tái sinh rễ tạo cây hòan chỉnh thì nuôi cấy chồi phúc bồn tử trên môi trường  MS có bổ sung 0,4 mg/lIBA và 0,3mg/l than họat tính.

4. Tiêu chuẩn cây giống in vitro

- Là cây nuôi cấy mô, đảm bảo đúng giống 100%, cây có độ đồng đều 95%. Sau 20 ngày nuôi cấy trên môi trường tạo rễ, cây đạt chiều cao từ 3 – 4cm, đường kính thân 2 – 3mm, số lá > 5 lá, có ≥ 5 rễ, chiều dài rễ từ 2 – 3cm, có tỷ lệ sống 90%.

- Tình trạng cây:

+ Cây sinh trưởng, phát triển tốt, khỏe mạnh, không có biểu hiện nhiễm sâu bệnh

+ Rễ trắng, mập, đầu rễ có nhiều lông hút.

+ Thân thẳng, cứng cáp, không bị tổn thương.

+ Lá dày, xanh non, không xuất hiện biến dị trên lá

Trung tâm Ứng dụng KH&CN Lâm Đồng

Lường Tú Nam